【產(chǎn)品名稱】

商品名稱：傳-染性胸膜肺-炎放線桿菌(APP)熒光PCR檢測試劑盒

Name ：Real-Time PCR Method

【包裝規(guī)格】50T/盒

傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)熒光PCR檢測試劑盒

本試劑盒適用于檢測標(biāo)本中指標(biāo)的定量檢測

【試劑組成】

詳見說明書

注：

1） 不同批號(hào)試劑不能混用。

2） 試劑盒內(nèi)各試劑組份足夠包裝規(guī)格所標(biāo)示的檢測次數(shù)。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒對(duì)指標(biāo)特異核酸序列設(shè)計(jì)引物和探針，用一步法熒光RT-PCR 技術(shù)對(duì)指標(biāo) RNA 進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對(duì)可疑感染者的病原學(xué)診斷。

【使用方法】

1. 樣品處理（樣本處理區(qū)）

1.1 樣本前處理

【標(biāo)本采集】

咽拭子：應(yīng)使用與用采樣拭子，適度拭抹咽后壁和兩側(cè)扁桃體部位，應(yīng)避免觸及舌 部 ； 迅 速 將 拭 子 放 入 標(biāo) 本 采 集 管 中 ， 旋 緊 管 蓋 并 密 封 ， 以 防 干 燥 。

全血：疑似感染病-人的靜-脈血 2mL 至 EDTA-2Na 抗凝管，8000rpm 離心 2min，取適量上清液于 1.5mL 滅菌離心管中。痰： 以清晨的 口痰為宜。先用清水漱口，囑患者用力咳出深部的痰于無菌樣本保存管，密封，即可送檢。

1.2 RNA 提取

推薦采用上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的RNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請(qǐng)按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2. 試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）

根據(jù)待檢測樣本總數(shù)，設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對(duì)照+1 管陽性對(duì)照；樣品每滿 7 份，多配制 1 份)，每測試反應(yīng)體系配制如下表：

將混合好的測試反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中，21uL/管。

3. 加樣（樣本處理區(qū)）

將步驟 1 提取的 RNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取 4μL，分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中，蓋好管蓋，混勻，短暫離心。

4. PCR 擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）

4.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi)；

4.2 設(shè)置好通道、樣品信息，反應(yīng)體系設(shè)置為 25μL；熒光通道選擇： 檢測通道

（Reporter Dye）FAM， 淬滅通道（Quencher Dye）NONE，ABI 系列儀器請(qǐng)勿選擇 ROX 參比熒光，選擇 None 即可。

4.3 推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：

傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)熒光PCR檢測試劑盒【注意事項(xiàng)】

① 所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行；

②試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化，完全混勻并短暫離心；

③反應(yīng)液應(yīng)避光保存；

④反應(yīng)中盡量避免氣泡存在，管蓋需蓋緊；

⑤使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)與用工作服；

⑥樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行，以免交叉污染；

⑦實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器；

⑧試劑盒里所有物品應(yīng)視為污染物對(duì)待，并按照《微生物生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通則》進(jìn)行處理。

5. 結(jié)果分析判定

5.1 結(jié)果分析條件設(shè)定

設(shè)置 Baseline 和 Threshold：一般直接按機(jī)器自動(dòng)分析的結(jié)果分析，當(dāng)曲線出現(xiàn)整體傾斜時(shí)，根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié) Baseline 的start 值(一般可在 3~15 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))、

stop 值(一般可在 5~20 范圍內(nèi)調(diào)節(jié))，以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動(dòng)閾值線至高于陰性對(duì)照)，重新分析結(jié)果。

5.2 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且有明顯的擴(kuò)增曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)明顯曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果如果同樣出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和明顯擴(kuò)增曲線則為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。

6. 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)

陰性質(zhì)控品：無明顯擴(kuò)增曲線且無 Ct 值顯示；

陽性質(zhì)控品：擴(kuò)增曲線有明顯指數(shù)生長期，且 Ct 值≤32； 以上條件應(yīng)同時(shí)滿足，否則實(shí)驗(yàn)視為無效。

7. 檢測方法的局限性

① 樣本檢測結(jié)果不樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

②樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

③陽性對(duì)照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會(huì)導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

④病原體在流行過程中基因突變、重組，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

⑤不同的提取方法存在提取效率差異，會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

⑥試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

【儲(chǔ)存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融次數(shù)不超過 5 次，有效期 12 個(gè)月。

產(chǎn)品圖片：

【生產(chǎn)企業(yè)】

企業(yè)名稱：上海烜雅生物科技有限公司

生產(chǎn)地址：金海公路3265號(hào)14幢11546室

上海烜雅生物科技有限公司生產(chǎn)的傳-染性胸膜肺-炎放線桿菌(APP)熒光PCR檢測試劑盒質(zhì)量高，價(jià)格低，售后有保證。為您的實(shí)驗(yàn)保駕護(hù)航。

請(qǐng)直接向我司客服索取說明書

本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷。

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