柱式軟骨RNAout

產(chǎn)品及特點
本產(chǎn)品是專門從各種軟骨組織樣品中快速提取總RNA的試劑盒，它能有效克服傳統(tǒng)TRIzol方法提取軟骨組織RNA時，十分容易產(chǎn)生糖蛋白和酸性多糖污染這一缺點。
1. 能有效去除糖蛋白、粘蛋白和DNA污染，OD260/280一般均在1.9以上。
2. RNA產(chǎn)率一般為5-15 μ g/100 mg。
3. 操作簡單，整個提取過程只需要十多分鐘。
4. 得到的RNA可以直接用于RT-PCR、Northern雜交、mRNA純化、PrimerExtension、RNA Protection、in vitro translation等研究。
使用及效果
將0.1 g左右的軟骨在液氮中研磨成粉后轉(zhuǎn)移到離心管中，加入1 mL溶液A并充分振蕩混勻，加入0.3 mL溶液B和0.2 mL自備氯仿，振蕩混勻，離心后轉(zhuǎn)移上清液到一新離心管中并加入0.5 mL溶液C，混勻后轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中離心半分鐘，用通用洗柱液洗離心吸附柱1-2次，后用100 μL RNA洗脫液洗脫即得到RNA。

產(chǎn)品及特點

由于血液富含RNase，因此血液RNA非常容易降解，是臨床分子生物學研究中的一個棘手的問題。為解決此問題，本公司在非凍型組織RNA保存液的基礎(chǔ)上，開發(fā)了本產(chǎn)品，它具有下列特點:

1. 能快速滲透到新鮮血液細胞內(nèi)，抑制RNA分子的降解。保存的血液RNA常溫可放置3天，4℃可放置5天，-20℃可放置3個月。

2. 操作簡單，直接將本產(chǎn)品和新鮮血液細胞沉淀按比例混合即可。

3. 適用于人新鮮血和哺乳動物新鮮血液，不適用于陳舊血液和凍凝血液，也不適用于禽類血液和其他動物血液。

4. 重復性好，效果跟進口同類產(chǎn)品相當。

5. 保存的樣品可直接用本公司血液RNAout提取RNA。

使用及效果

將本產(chǎn)品與新鮮血液樣品按4:1的比例（4份本產(chǎn)品加1份新鮮血液）混合后即可放置。放置結(jié)束后將樣品轉(zhuǎn)移到離心管中，5000 g室溫離心1分鐘，小心吸出淺粉紅色的上清液，棕紅色沉淀（血細胞和蛋白沉淀）直接用于后續(xù)的總RNA提取。

1. 新鮮細胞：如果試劑沒有問題，且外源性污染也可以排除，那么降解幾乎都來自裂解液的用量不足。如果將裂解液直接加入培養(yǎng)皿中裂解細胞，一定要使裂解液能覆蓋住細胞。

2. 新鮮組織：某些富含內(nèi)源核酸酶的樣品(如肝臟，胸腺等)，即使使用電動勻漿器勻漿也不能避免RNA的降解。更可靠的方法是：在液氮條件下將組織研碎，并且勻漿時使用更多裂解液。

3. 冷凍樣品：樣品取材后應立即置于液氮中速凍，然后移至-70℃冰箱保存。樣品決不能未經(jīng)液氮速凍而直接保存于-70℃冰箱中。冷凍樣品，即使是冷凍細胞，如果不在液氮條件下研磨碎，而直接加入裂解液中勻漿，RNA也比新鮮樣品更容易降解。樣品在與裂解液充分接觸前決不能出現(xiàn)融化，所以研磨用具必須預冷，在碾磨過程中要及時補充液氮。樣品研碎后，在液氮剛剛揮發(fā)完時，將樣品迅速轉(zhuǎn)移到含裂解液的容器中，立即混勻勻漿。

4. 外源RNA酶的污染：試劑，器械及實驗環(huán)境中的RNA酶進入實驗系統(tǒng),可考慮華越洋產(chǎn)品：外源RNA酶清除劑（RNase remover)解決。

5. 內(nèi)源RNA酶的污染：抑制劑失效或者用量不夠，實驗樣品過多；勻漿時溫度過高。

RNA提取得率低

1. 該組織或者細胞中RNA含量偏低：不同細胞和組織中RNA的豐度不同，如肝臟，胰腺，心臟等是高豐度組織(總RNA含量2-4μg/mg)，腦，胚胎，腎臟，肺，胸腺，卵巢等是中豐度組織(總RNA含量0.05-2μg/mg)，膀胱，骨，脂肪等是低豐度組織(總RNA含量<0.05μg/mg)。

2. 組織起始量太少或者太多：樣品量過少，則細胞組織中RNA含量較低；樣品量過多則可能超過裂解液的裂解能力，裂解將不完全，從而導致RNA得率低。