液體樣品蛋白純化回收試劑盒

產品及特點 
本產品專門用于對液體樣品進行蛋白提取濃縮、脫鹽、脫去垢劑、脫還原劑等。本產品具有下列特點：
1. 適用于各種液體樣品，包括蛋白溶液、胞漿提取液、胞核提取液、細胞或微生物培養(yǎng)基上清液、血液、尿液、腦脊液等。也適于原代或傳代細胞懸液。
2. 靈敏，對一般蛋白樣品，濃度可達 1ug/mL；對含 SDS 的樣品，濃度為 5 ug/mL。
3. 蛋白回收率 95%，遠高于經典的丙酮或三氯醋酸沉淀法，且可有效去除樣品中的脂質，不影響后續(xù) SDS-PAGE 和 Western Blot 等生物實驗
4. 得到的蛋白質可用于后續(xù)的 SDS-PAGE、免疫沉淀和質譜分析等實驗。但蛋白已經變性，沒有活性。
5. 能有效去除液體樣品中的鹽(1M)、還原劑(1%巰基乙醇或 DTT)、去垢劑(5%SDS、1% Triton X-100、1% NP-40)和油脂等。
6. 操作方便迅速，只需要混勻后離心，不需要其他儀器。
7. 產品穩(wěn)定，可室溫長期放置。
運輸及保存 常溫運輸和保存，有效期一年。
自備試劑 1M Tris-HCl，pH8.8（也許會用到）

使用方法 使用方法一（用于不含 SDS 的液體樣品，但樣品蛋白濃度不能低于 1 ug/mL）
1、 將 100 μL 需要液體蛋白樣品轉移到一個自備的 1.5 mL 塑料離心管中。
2、 加入 10 μL 溶液 A，渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。
3、 冰上放置 15 分鐘。
4、 加入 10 μL 溶液 B，輕輕混勻。
5、 冰上放置 60 分鐘。
6、 4℃12000-15000×g 離心 10 分鐘。
7、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、 加入 1 mL 冰浴的溶液 C，震蕩混勻后 4℃12000-15000×g 離心 15 分鐘。
9、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
10、短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。
11、樣品放 4℃保存或立即電泳檢測?？芍苯佑?1×SDS-PAGE 上樣液或其他電泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍色的溴酚藍染料變黃，則說明有殘留酸性物質污染，必須加少量自備的 1M Tris-HCl（pH8.8）緩沖液，直到顏色變成藍色為止，否則將影響電泳結果。
使用方法二（用于含 SDS 的液體蛋白樣品，但樣品蛋白濃度不能低于 5 ug/mL）
1、 將 200 μL 液體蛋白樣品轉移到一個自備的 1.5 mL 塑料離心管中。
2、 加入 8 μL 溶液 B，渦旋激烈震蕩 10-30 秒混勻。
3、 冰上放置 30 分鐘或-20℃放置 15 分鐘（過夜放置更好）。
4、 4℃ 12000-15000×g 離心 15 分鐘。
5、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
6、 加入 1 mL 冰浴的溶液 C，震蕩混勻后 4℃ 12000-15000×g 離心 15 分鐘。
7、 小心移棄上清液，保留蛋白沉淀。
8、 短暫離心，小心移棄殘留上清液后，將有蛋白沉淀的離心管敞開放置在冰上，空氣晾干。一般需要 10 分鐘左右。
9、 樣品放 4℃保存或立即電泳檢測?？芍苯佑?1×SDS-PAGE 上樣液或其他泳緩沖液溶解蛋白沉淀，取適量上樣。如果藍色的溴酚藍染料變黃，則說明有殘留酸性物質污染，必須加少量自備的 1M Tris-HCl（pH8.8）緩沖液，直到顏色變成藍色為止，否則將影響電泳結果。技術資料 TCA 與蛋白質TCA 與蛋白質之間主要有以下幾個方面的作用:①在酸性條件下與蛋白質形成不溶性鹽.②作為蛋白質變性劑使蛋白質構象發(fā)生改變，暴露出較多的疏水性基團，使之聚集沉淀.③隨著蛋白質分子量的增大，其結構復雜性與致密性越大，TCA 可能滲入分子內部而使之較難被完全除去，在電泳前樣品加熱處理時可能使蛋白質結構發(fā)生酸水解而形成碎片，而且隨時間的延長這一作用愈加明顯.④電泳圖譜顯示，BSA，HSA 單體譜帶有較明顯的展寬現象，這可能是由于 TCA 的結合，使 SDS與蛋白質的結合量產生偏差，從而造成蛋白質所帶電荷的不均一性，造成遷移率的不一致.我們認為在電泳時使用 TCA 對蛋白質樣品的濃縮或除鹽時，對于分子質量大的蛋白質，要慎重選擇 TCA.對小分子量蛋白質的濃縮，采用 TCA 時也有兩點需要 注意:一是用 TCA 沉淀后，盡量用丙酮徹底抽提 TCA;二是樣品處理后要盡快進行電泳分析，以免發(fā)生聚集及斷裂，造成結果分析的不準確.