ATCC貨號：CRL-1573

293細胞 [HEK-293](胚腎細胞)傳代即去除原培養(yǎng)基并將細胞從原培養(yǎng)體系轉移到新鮮的生長培養(yǎng)基中，該過程可使細胞系或細胞株進一步增殖。

接種后培養(yǎng)細胞的生長將從延滯期進入對數(shù)期，即：細胞呈指數(shù)增殖。當貼壁培養(yǎng)的細胞已占據(jù)所有可用基質、沒有擴增空間，或者懸浮培養(yǎng)的細胞已超過培養(yǎng)基所能支撐的能力，無法進一步生長時，細胞增殖速度將大大降低甚至完全停止  。為了將細胞密度維持在*水平，以便細胞繼續(xù)生長，并且刺激其進一步增殖，必須培養(yǎng)物分成若干部分，并添加新鮮培養(yǎng)基。

293細胞 [HEK-293](胚腎細胞)淋巴母細胞樣細胞呈球形，通常懸浮生長，不貼附在基質表面。

293細胞 [HEK-293](胚腎細胞)細胞培養(yǎng)實驗室

無菌工作區(qū)域：

細胞培養(yǎng)實驗室的主要要求是需要維持細胞培養(yǎng)工作區(qū)域處于無菌狀態(tài)。盡管*設置獨立的組織培養(yǎng)室，在較大的實驗室內劃出的細胞培養(yǎng)區(qū)域同樣可用于無菌操作、孵育以及細胞培養(yǎng)物、試劑和培養(yǎng)基的儲存。獲得無菌條件的最為簡單、經(jīng)濟的方式就是使用細胞培養(yǎng)通風櫥  (即：生物安全柜)。

細胞培養(yǎng)通風櫥：

細胞培養(yǎng)通風櫥可提供無菌工作環(huán)境，同時限制多種微生物學操作產(chǎn)生的感染性潑濺或氣體揮發(fā)。目前已經(jīng)開發(fā)出 I 級、II 級和 III 級三種細胞培養(yǎng)通風櫥，以適應不同的研究和臨床需要。

細胞培養(yǎng)通風櫥的分類

I  級細胞培養(yǎng)通風櫥配合良好的微生物學技術，可為實驗室工作人員和環(huán)境提供相當水平的防護，但是此類通風櫥無法防止培養(yǎng)物污染，其在設計和空氣流動性上均與化學通風櫥類似。

II 級細胞培養(yǎng)通風櫥用于涉及 BSL-1、2 和 3 級物質的工作，同樣可為細胞培養(yǎng)實驗提供必需的無菌環(huán)境。II 級生物安全柜適用于操作可能具有危害的物質  (例如：來源于靈長類動物的培養(yǎng)物、被病毒感染的培養(yǎng)物、放射性同位素、致癌性或毒性試劑)。

III  級生物安全柜為氣密性設備，可為工作人員和環(huán)境提供能夠達到的*等級的防護。

III  級生物安全柜適用于涉及已知人類致病原及其他  BSL-4  級物質的工作。

細胞培養(yǎng)通風櫥的氣流性質細胞培養(yǎng)通風櫥通過維持工作區(qū)域上方穩(wěn)定、單向的  HEPA 過濾空氣流動，保護工作環(huán)境免受灰塵及其他空氣污染物污染。氣流可以呈水平方向，與工作臺面平行吹過，或者也可呈垂直方向，從通風櫥上方吹向工作臺面。

根據(jù)設計的不同，水平流通風櫥可為培養(yǎng)物  (即：空氣吹向使用者)  或者使用者  (即：空氣由通風櫥內的負壓經(jīng)前方吸入)  提供保護。而垂直流通風櫥則可同時為使用者和培養(yǎng)的細胞提供良好的保護。

超凈工作臺水平層流或垂直橫流"超凈工作臺"不屬于生物安全柜；該設備可將  HEPA 過濾空氣由工作臺后方經(jīng)工作臺面吹向使用者，導致使用者可能接觸到有潛在危害的物質。此設備只能為產(chǎn)品提供保護。超凈工作臺可用于某些潔凈操作，例如：無菌或電子設備的無塵組裝，不得用于操作細胞培養(yǎng)物質或藥物配方以及可能具有的物質。

有關生物安全柜的選擇、安裝和使用的更多信息，請參閱《微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全》第五版

293細胞 [HEK-293](胚腎細胞)無菌技術核對表

以下核對表簡要列出了一些建議和方法，指導您切實使用無菌技術。

工作區(qū)域

細胞培養(yǎng)通風櫥設置是否正確？

細胞培養(yǎng)通風櫥所在區(qū)域有無氣流和直接出入通道？

工作臺面是否整潔？是否僅僅放置了實驗所需的物品？

開始工作前用 70% 乙醇擦拭工作臺面了嗎？

是否定期對培養(yǎng)箱、冰箱、冰柜及其他實驗室設備進行清潔和消毒？

個人衛(wèi)生

您洗手了嗎？

您穿戴個人防護設備了嗎？

如果您留了長發(fā)，您把頭發(fā)扎在后面了嗎？

您是用移液器操作液體嗎？

試劑和培養(yǎng)基

您采用適當?shù)姆椒▽嶒炇抑信渲频乃性噭?、培養(yǎng)基和溶液進行滅菌了嗎？

在將容器、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板和培養(yǎng)皿放入工作臺面之前，您用 70% 乙醇擦拭其外部了嗎？

試劑瓶、培養(yǎng)瓶及其他容器不使用時蓋緊了嗎？

是否已將所有培養(yǎng)板均放入無菌重復密封袋中？

是否有試劑外觀渾濁？是否被污染了？試劑中有漂浮顆粒嗎？有難聞氣味嗎？有顏色異常嗎？如果出現(xiàn)上述情況，是否已對其進行去污并丟棄？

操作

您操作時是否緩慢、謹慎、注意無菌技術了？

在將移液器、試劑瓶和培養(yǎng)瓶放入細胞培養(yǎng)通風櫥之前，用 70% 乙醇擦拭其表面了嗎？

是否將蓋子口朝下放置在工作區(qū)域？

您是使用無菌玻璃吸管或者一次性無菌塑料吸管操作液體嗎？

無菌吸管是否僅僅使用一次以免交叉污染？

您是否注意到避免使吸管*觸碰到任何非滅菌物品包括瓶口螺紋的外緣？

發(fā)生液體潑濺時是否立即吸干并用 70% 乙醇擦拭該區(qū)域？

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