描述： RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)對(duì)動(dòng)物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，是經(jīng)典和最常用的細(xì)胞組織快速裂解液。使用RIPA 裂解緩沖液制備用于Western特別是用于免疫共沉淀的裂解產(chǎn)物已經(jīng)是一種首選的標(biāo)準(zhǔn)操作，也適用于大部分抗原表位檢測(cè)，特別是免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn)。

規(guī)格：100ml  500ml

成分：50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS.

儲(chǔ)存：4 ℃保存 12個(gè)月有效

使用說明：

制備細(xì)胞裂解產(chǎn)物：

1. 800g 4℃離心5分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，估計(jì)細(xì)胞離心后的體積（PCV, 106 cells=~20ul, 107 cells =~100ul PCV）；

2. 每50～100ul PCV加入5倍體積RIPA裂解緩沖液（250~500ul）,冰浴放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

3. 12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得細(xì)胞總蛋白產(chǎn)物。

注意：如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先95℃加熱5分鐘，迅速冰浴5分鐘，再進(jìn)行步驟3

制備組織裂解產(chǎn)物：

1. 取50-100mg組織在冰上剪成碎片，用預(yù)冷的PBS洗滌2次離心棄去PBS；

2. 加入 0.5-1ml 預(yù)冷 RIPA 裂解緩沖液；

3. 4℃用玻璃勻漿器勻漿20-40次，直到95％的細(xì)胞被破碎，然后在冰浴中放置10分鐘，并每隔5分鐘在漩渦混合儀上振蕩30秒；

4. 12000g 4℃離心10分鐘，將上清轉(zhuǎn)移到新的離心管中，即得組織總蛋白產(chǎn)物。

注意：如所得蛋白產(chǎn)物較為粘稠，可先95℃加熱5分鐘，迅速冰浴5分鐘，再進(jìn)行步驟4

說明：

1. 轉(zhuǎn)移上清液時(shí)不要吸入底部的沉淀物；

2. 在做免疫沉淀或免疫共沉淀時(shí)最好在實(shí)驗(yàn)前進(jìn)行蛋白提取，避免某些不穩(wěn)定蛋白的降解；

3. RIPA裂解緩沖液中未加入蛋白酶抑制劑，用戶可自行選擇添加。