描述：冷室、組織塊、包埋劑、切片刀之間的溫度平衡于優(yōu)化的切片溫度(optimum cutting temperature, OCT)附近，是獲得高質(zhì)量冰凍切片的保證。不同的組織因構(gòu)成各異而具有不同的OCT溫度。當(dāng)冰凍組織在接觸刀刃的瞬間，局部溫度短暫升高發(fā)生局部融化；隨后切開的組織薄片暴露于冷室被再次驟冷冰凍。這種融化-冰凍溫度變化是切片皺褶或斷裂的內(nèi)在原因，在此基礎(chǔ)上切片的軟硬度和厚薄度進(jìn)一步影響皺褶產(chǎn)生⁽¹⁾。在切片過程中，冰凍包埋劑也須歷經(jīng)與組織類似的溫度變化，這就要求包埋劑必須具有與組織塊相近的冰凍速度和軟硬韌度。

我公司提供的Tissue OCT-Freeze Medium是由高分子聚合物組成的無色透明粘稠液體，驟冷時固化，其冰凍速度和軟硬韌度與組織細(xì)胞相近，因而能保證優(yōu)化的OCT溫度，并具有支持填充、減少皺褶和斷裂等作用。可任意添加于切片機(jī)的樣品架以支持和固定樣品。

與廣為使用的Tissue-Tek OCT Compound包埋劑相比，普利萊的包埋劑的突出優(yōu)點是：支持超薄和超厚(2~100 μm)冰凍切片并減少皺褶和斷裂。不影響后續(xù)免疫組化、原位雜交、病理染色等操作，并可經(jīng)由水或PBS沖洗完全去除，是理想的組織冰凍包埋劑。

適用：組織和培養(yǎng)細(xì)胞的冰凍包埋固定。用于臨床快速病理染色診斷、免疫組化、原位雜交。

組成：120 ml，4oC 1年?？沙胤胖谩３睾?oC為無色透明粘稠液體，溫度降低時逐漸變粘稠并固化。

使用前標(biāo)本準(zhǔn)備：

冰凍切片標(biāo)本可采用 (1) 新鮮組織，特點是快速，但未用完的包埋組織塊不能保存；(2) 使用經(jīng)典方法10%甲醛或4%多聚甲醛室溫2~10分鐘固定過的組織，優(yōu)點是既不影響后續(xù)步驟，包埋組織塊又可長期冰凍保存，隨時再用，缺點是步驟稍繁。(3) 培養(yǎng)細(xì)胞，800g離心10分鐘收集培養(yǎng)細(xì)胞，用吸頭或針頭撥出細(xì)胞沉淀塊，放入OCT包埋劑內(nèi)。

應(yīng)避免采用降低組織冰點的甲醇乙醇固定。本產(chǎn)品說明書不提供關(guān)于組織取材、滲透、固定、冰凍切片等技術(shù)信息。用戶應(yīng)閱讀冰凍切片機(jī)操作手冊，參考各種常規(guī)技術(shù)方法。

使用方法：

1. OCT包埋：用水或PBS沖洗固定的組織塊，用吸水紙吸去液體。在盛標(biāo)本的包埋模子內(nèi)，擠出適量的包埋劑，放入組織和細(xì)胞沉淀塊，加包埋劑完全埋沒組織塊?？捎?層鋁箔紙折疊成簡易的模子。如有氣泡可用針頭或吸頭吸出。

2. 冰凍：將盛有組織細(xì)胞和包埋劑的模子，正置于切片機(jī)冷室內(nèi)冰凍10分鐘。此時，包埋劑為乳白色固體。包埋劑和組織冷凍時體積略有膨脹，因此模子應(yīng)正置，由底部向頂部進(jìn)行冰凍。也可將OCT包埋的組織置于干冰或液氮，或放入－40~－70 oC冰箱冰凍固化保存，用前取出置于切片機(jī)冷室內(nèi)平衡溫度(否則損壞刀)。

3．切片：可在切片機(jī)的組織卡盤(chuck)上加少許包埋劑并在其固化前嵌入組織塊，然后再于組織周圍加入少許包埋劑使其穩(wěn)定。進(jìn)行常規(guī)切片，厚度范圍2~100 μm。

4. 收片后，用適量水或PBS沖洗切片3次，每次2?3分鐘，洗除包埋劑。而后可進(jìn)行常規(guī)組化染色、病理染色、原位雜交。未用完的組織塊可冷凍儲存。

附表為新鮮組織的冰凍切片OCT溫度。固定過的組織的OCT溫度升高相應(yīng)5~10°C

通常折中采用?20°C。肝腦脾等組織的OCT切片溫度應(yīng)在?10 oC，否則易碎。脂肪或含脂肪多的組織的OCT切片溫度更低，否則易皺褶。

常見問題及解決方案：

參考文獻(xiàn)：

Pearse AGE. Histochemistry, theoretical and applied, vol. 1: preparative and optical technology. 4th Ed. Edinburgh, UK: Churchill Livingstone, 1980.