基本信息：
產(chǎn)品名稱：ATP含量HPLC法檢測(cè)試劑盒
測(cè)試方法: HPLC法
規(guī)格 : 50管/48樣
貨號(hào)：GOY-01S6550
分類：氧化磷酸化系列
測(cè)定意義：
ATP廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測(cè)定ATP含量并且計(jì)算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。

測(cè)定原理：

肌酸激酶催化肌酸和ATP反應(yīng)生成磷酸肌酸，可在700nm下用磷鉬酸比色法檢測(cè)磷酸肌酸含量，以此反應(yīng)ATP含量。

自備儀器和用品：

分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1瓶，4℃避光保存，未變成藍(lán)綠色之前均可使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1支（EP管中），2 μmol/mL酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
測(cè)定步驟：
1. 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預(yù)熱30 min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對(duì)照管：取EP管，加入4μL上清液，40μL蒸餾水，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
其中標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管，測(cè)定管和對(duì)照管每個(gè)樣均需做。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測(cè)定一次。產(chǎn)品僅用于科研
小鼠Wolfram綜合征蛋白1(WFS1)ELISA試劑盒 ，英文名： WFS1 ELISA Kit

人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA檢測(cè)試劑盒Human11-dehydro-thromboxaneB2,11-DH-TXB2ELISAKit 96T/48T

大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)免疫試劑盒 Rat maix metalloproteinase 4,MMP-4 ELISA Kit

英文名稱RatCCL24ELISAKit大鼠CCL24規(guī)格：96T/48T

快速鹽析法DNA萃取試劑盒50次

ELISAKitCTACK/CCL27人皮膚T細(xì)胞虜獲趨化因子規(guī)格：48T/96T
鴨胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human ai macrophage aibody (ai-chromosome Ab) ELISA Kit 人抗染色體抗體(ai-chromosome Ab)ELISA試劑盒

HumanEpithelialneuophilactivatingpeptide78,ENA-78ELISAKit 人上皮中性粒細(xì)胞活化肽78(ENA-78/CXCL5)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACTHELISAKit大鼠促腎上腺皮質(zhì)激素規(guī)格：48T/96T

血影細(xì)胞(GHOST)制備試劑盒20次

MousePlatelet-DerivedGrowthFactorAB,PDGF-ABELISAKit小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
Anti-HBA1/FITC 熒光素標(biāo)記人類血紅蛋白α1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Anti-PD-1/FITC 熒光素標(biāo)記程序性死亡1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Rhesus antibody Rh Batroxobin Protein 蛇毒巴曲酶抗體 規(guī)格 0.2ml

ADAMTS7 peptide 整合素樣金屬蛋白酶與凝血酶1型-7抗原 0.5mg

Gastrin Releasing Peptide 英文名稱： 促胃泌素釋放肽抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Rabbit Anti-rat IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗大鼠IgG 規(guī)格 0.1ml

Anti-PD-1/FITC 熒光素標(biāo)記程序性死亡1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
ATP含量HPLC法檢測(cè)試劑盒Anti-Slit2/Slil3/FITC 熒光素標(biāo)記兔抗人、大、小鼠神經(jīng)遷移蛋白Slit2/3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

Caspase-3 (CPP32) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg

神經(jīng)纖毛蛋白-1抗體 Anti-NRP-1 0.1ml

SLC40A1 英文名稱： 鐵蛋白FP1抗體 0.1ml

Ecm2 英文名稱： 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白2抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh phospho-p107(Thr369) 0酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤樣蛋白p107抗體 規(guī)格 0.1ml

Caspase-3 (CPP32) 半胱胺酸蛋白酶蛋白-3(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
操作步驟：
1. 樣品的準(zhǔn)備：
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備：收集細(xì)胞，用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備：動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ，含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例， 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見(jiàn)電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心，取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（P1511）測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大，該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量，用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如，小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定，可以冰浴保存；如果當(dāng)天不能完成測(cè)定，可以-70 ℃凍存，但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作：
a. WST-8酶工作液的配制： 參照下表，根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量，配制適量WST-8酶工作液，配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意：由于酶溶液的用量較少且易沉降，必須注意在使用前先輕輕離心一下，然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制：將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻，按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋，即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存，可當(dāng)天使用，但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備：需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品，用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度：20U/ml，10U/ml ，5U/ml，2.5U/ml，1.25U/ml，0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升，參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說(shuō)明：為避免稀釋后SOD酶活性的下降， SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用；本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品，但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽(yáng)性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
3. 樣品測(cè)定：
a. 參考下表使用96孔板加入各個(gè)組分，注意設(shè)置樣品孔和各種空白對(duì)照孔。
注意：加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液后反應(yīng)即會(huì)開(kāi)始，可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應(yīng)啟動(dòng)工作液的時(shí)間先后差異而導(dǎo)致的誤差。
b. 37℃孵育30分鐘。
說(shuō)明：孵育25至35分鐘檢測(cè)出來(lái)的SOD活力無(wú)顯著差異，但為檢測(cè)結(jié)果的一致性，推薦孵育30分鐘。
c. 450nm 測(cè)定吸光度。如無(wú)450nm 濾光片，可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長(zhǎng)作為參考波長(zhǎng)進(jìn)行雙波長(zhǎng)測(cè)定。
4. 樣品中總SOD活力的計(jì)算：
a. 百分率的計(jì)算：
參考如下計(jì)算公式計(jì)算百分率：
百分率＝[(A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2)－(A樣品－A空白對(duì)照3)] / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果沒(méi)有設(shè)置空白對(duì)照3，則可以把計(jì)算公式簡(jiǎn)化為：
百分率＝(A空白對(duì)照1－A樣品) / (A空白對(duì)照1－A空白對(duì)照2) × 100%
如果計(jì)算出來(lái)的百分率小于30% 或大于70% ，則通常需要把該樣品重新測(cè)定。盡量使樣品的百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測(cè)定出來(lái)的百分率偏高，則需適當(dāng)稀釋樣品；如果測(cè)定出來(lái)的百分率偏低，則需重新準(zhǔn)備濃度較高的待測(cè)樣品。
b. SOD酶活力單位的定義：在上述化酶藕聯(lián)反應(yīng)體系中百分率為50% 時(shí)，反應(yīng)體系中的SOD酶活力定義為一個(gè)酶活力單位 (unit)。注意：SOD的活力單位的定義方式有很多種，不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進(jìn)行適當(dāng)換算。