糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶微量法檢測試劑盒
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糜蛋白酶-胰凝乳蛋白酶微量法檢測試劑盒

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品牌 谷研
保質(zhì)期 詳見說明書
含量 詳見說明書
是否危險化學品
規(guī)格 100管/96樣
貨號 GOY-01S6633
檢測方法 微量法
分類 蛋白酶系列
用途 僅供科研使用
包裝
商品介紹

測定步驟:
1. 分光光度計/酶標儀預熱30min,調(diào)節(jié)波長到510 nm,蒸餾水調(diào)零。
2.
試劑三置于37℃水浴中預熱30 min。
3.
空白管:取EP管,加入4μL蒸餾水,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A空白管。
4.
標準管:取EP管,加入4μL標準品,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A標準管。
5.
對照管:取EP管,加入4μL上清液,40μL蒸餾水,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
6.
測定管:取EP管,加入4μL上清液,40μL試劑二,40μL試劑三,混勻后置于37℃水浴中保溫15min;加入試劑四120μL,混勻后于510nm測定吸光度,記為A測定管。
其中標準管和空白管只需做一管,測定管和對照管每個樣均需做。
注意:空白管和標準管只需測定一次。

基本信息:
產(chǎn)品名稱:糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶微量法檢測試劑盒
測試方法: 微量法
規(guī)格 : 100/96
貨號:GOY-01S6633
分類:蛋白酶系列
測定意義:
糜蛋白酶,又稱胰凝乳蛋白酶,是胰腺分泌的一種蛋白水解酶,能迅速分解變性蛋白質(zhì)。糜蛋白酶的功能與胰蛋白酶相似,但是具有分解能力強、毒性低和不良反應小等優(yōu)點。臨床上糜蛋白酶用于痰液稀化,對膿性和非膿性痰液均有效;也用于創(chuàng)傷或手術(shù)后傷口愈合,如白內(nèi)障摘除。

測定原理:

糜蛋白酶催化N-Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA水解,產(chǎn)物在410nm有特征光吸收;通過測定410 nm 光吸收增加速率,來計算糜蛋白酶活性。

自備儀器和用品:

臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、酶標儀、96孔板、冰和蒸餾水。

操作步驟:
1. 樣品的準備:產(chǎn)品僅用于科研
a.
細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b.
組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml肝素鈉) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d.
使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e.
根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2.
試劑盒的準備工作:
a. WST-8
酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b.
反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (
可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
3.
樣品測定:
a.
參考下表使用96孔板加入各個組分,注意設置樣品孔和各種空白對照孔。
注意:加入反應啟動工作液后反應即會開始,可以在低溫操作或用排槍操作以減小各孔間因加入反應啟動工作液的時間先后差異而導致的誤差。
b. 37
℃孵育30分鐘。
說明:孵育2535分鐘檢測出來的SOD活力無顯著差異,但為保證檢測結(jié)果的一致性,推薦孵育30分鐘。
c. 450nm
測定吸光度。如無450nm 濾光片,可以使用420-480nm 的濾光片。也可以使用大于600nm 的波長作為參考波長進行雙波長測定。
4.
樣品中總SOD活力的計算:
a.
抑制百分率的計算:
參考如下計算公式計算抑制百分率:
抑制百分率=[(A空白對照1A空白對照2)(A樣品-A空白對照3)] / (A空白對照1A空白對照2) × 100%
如果沒有設置空白對照3,則可以把計算公式簡化為:
抑制百分率=(A空白對照1A樣品) / (A空白對照1A空白對照2) × 100%
如果計算出來的抑制百分率小于30% 或大于70% ,則通常需要把該樣品重新測定。盡量使樣品的抑制百分率在30-70%范圍內(nèi)。如果測定出來的抑制百分率偏高,則需適當稀釋樣品;如果測定出來的抑制百分率偏低,則需重新準備濃度較高的待測樣品。
b. SOD
酶活力單位的定義:在上述化酶藕聯(lián)反應體系中抑制百分率為50% 時,反應體系中的SOD酶活力定義為一個酶活力單位 (unit)。注意:SOD的活力單位的定義方式有很多種,不同的活力單位需根據(jù)其定義的不同進行適當換算。

小鼠PHD指蛋白8(PHF8)ELISA試劑盒 ,英文名: PHF8 ELISA Kit

人抗0脂抗體(Apl/APA)ELISA檢測試劑盒Humanai-phospholipidaibody,Apl/APAELISAKit 96T/48T

大鼠胱抑素S(CST4)免疫試劑盒 Rat cystatin S,CST4 ELISA kit

英文名稱PIIICPIII型前膠原肽(C)規(guī)格:96T/48T

0酸二酯酶2(Phosphodiesterase2)0.25單位

ELISAKitANX-Ⅴ人膜聯(lián)蛋白Ⅴ規(guī)格:48T/96T
小鼠葉酸(FA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Human soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit 人可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒

Humanarylhydrocarboeceptor,AhRELISAKit 人芳香烴受體(AhR)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor16-AlphaOHE-1(Human16-AlphaHydroxyesogen1)ELISAKit16α羥基雌同1規(guī)格:48T/96T

飲料鎂離子濃度酶反應光譜法定量檢測試劑盒20

MouseLeptinSolubleReceptor,sLRELISAKit小鼠可溶性瘦素受體(sLR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-GLP-2/FITC
熒光素標記胰高血糖素樣肽-2抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Anti-Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375) /FITC 熒光素標記0酸化μ-型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

Rhesus antibody Rh BK channel BK通道蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml

Aggrecan 軟骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖抗原 0.5mg

HA tag 英文名稱: HA tag標簽抗體 0.1ml

Rhesus antibody Rh RBFA 核糖體結(jié)合因子RBFA抗體 規(guī)格 0.2ml

Anti-Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375) /FITC 熒光素標記0酸化μ-型受體抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
糜蛋白酶/胰凝乳蛋白酶微量法檢測試劑盒Anti-TBX3/FITC 熒光素標記轉(zhuǎn)錄因子Tbx3抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml

MAPKK2 原活化蛋白激酶激酶Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg

性激素結(jié)合球蛋白抗體 Anti-SHBG 0.2ml

SIGLEC14 英文名稱: 唾液酸結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集素14抗體 0.2ml

ELK4 英文名稱: 血清反應因子輔助蛋白1抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Phospho-MDM2 (Ser166) 0酸化雙微體2癌基因抗體 規(guī)格 0.1ml

MAPKK2 原活化蛋白激酶激酶Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
試劑組成和配制:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃避光保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃避光保存,未變成藍綠色之前均可使用。
標準品:液體×1支(EP管中),2 μmol/mL酚標準液,4℃保存。


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