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原位雜交過程

雜交前可進行預雜交，以防止較高的背景染色。預雜交條件與雜交條件相同，只是預雜交液中不含探針和硫酸葡聚糖。

靶DNA的變性（對mRNA的原位雜交無需此步）

樣品DNA的變性在DNA-DNA雜交檢測中是必須的步驟，但同時可能會造成樣品形態(tài)學的部分破壞，此步是實驗中需要優(yōu)化的一個步驟。常用的變性方法為堿變性和熱變性，實驗時可以摸索變性時間、變性溫度等參數(shù)以獲得佳條件。

如使用熱變性方法，可在雜交時將探針的變性和樣品DNA變性同步進行：將樣品和探針溶液加蓋蓋玻片，置于烘箱80℃變性，染色體DNA樣品處理2min，后冷卻至37℃進行雜交。組織樣品DNA的變性時間可增加至80℃10min。

肝纖維化動物模型化學性損傷法：

雄性Wistar大鼠，體重130g左右，用腹腔內(nèi)注射，次20mg/100g體重，從第二次起12mg/100g體重，每周注射2次，共8周。

評價:第3周，在肝小葉間中間帶出現(xiàn)大片的肝細胞變性壞死和炎細胞浸潤，炎細胞浸潤、壞死細胞數(shù)和程度超過豬模型。6周后出現(xiàn)纖維束，纖維晚于和少于豬模型。大鼠肝纖維組織中有I型膠原的mRNA增多。

肝纖維化動物模型特點：

①肝纖維化出現(xiàn)早，出現(xiàn)率高；

②動物整體損傷輕微，毛發(fā)、生長情況正常；

③纖維化組織中大量膠原，Ⅲ、Ⅳ型前膠原mRNA增多。

慢性活動性患者循環(huán)復合物多為陽性，豬模型可用于慢性所致肝纖維化的研究，對于研究復合物的形成，沉積和清除及對于防治損傷性肝纖維化有效的篩選，具有意義。

（IDA）發(fā)生的主要原因是由于鐵的攝入不足和/或鐵丟失過多，引起機體血紅蛋白合成障礙導

致。IDA模型有大鼠、小鼠、兔、雞、貓、狗、猴等，其中以大鼠為常用。

動物模型方法：

1. 給予低鐵飲食。飼料含鐵量≥50mg/kg能滿足大鼠的基本需要，低鐵飼料的鐵含量≤10mg/kg，標準飼

料鐵含量為220-270mg/kg。飼料配方以酪蛋白或脫脂奶粉作為蛋白來源，玉米淀粉或蔗糖作為碳水化合物來源，加入植物油，混合維生素和混合無機鹽配制。

近來通過絡合劑1%EDTA-2Na除去國產(chǎn)飼料中的鐵，取得滿意的實驗結(jié)果。

2. 給動物逐次少量放血，造成鐵的慢性丟失。通常采用剪尾的方法，一方面放血不但引起鐵的丟失，而且還可以引起其它營養(yǎng)素的丟失；另一方面剪尾易

引起動物而。

3. 低鐵飲食輔以定期少量放血。