PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

fCynatratoside A  中文名：白薇苷A  分子式：C28H40O8    豬內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1elisa試劑盒   豬內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T  

Cynanoside F  中文名：  分子式：C41H62O15    豬內(nèi)皮生長(zhǎng)因子elisa試劑盒   豬內(nèi)皮生長(zhǎng)因子試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T 

Cyclopropyl 2-fluorobenzyl ketone  中文名：  分子式：C11H11FO    豬生成素受體/含球蛋白樣環(huán)和上皮生長(zhǎng)因子樣域酪酸激酶2(Tie-2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Cyasterone  中文名：杯莧甾酮  分子式：C29H44O8    豬生成素1(ANG-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

CTU Guanamine  中文名：  分子式：C17H26N10O4    豬乙酰膽堿受體抗體(AChRab)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱：   fatty acid-binding protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   FABP4  Venlafaxine  中文名：文拉法辛  分子式：C17H27NO2  度：98.0%

脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱：   Adipocyte Fatty Acid Binding Protein   英文縮寫：   a FABP   規(guī)格：   48T/96T  Valsartan  中文名：纈沙坦  分子式：C24H29N5O3 

脂肪細(xì)胞型脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱：   Adipocyte Fatty Acid Binding Protein   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   a FABP  Odoroside H  18810-25-8  中文名：  分子式：C30H46O8  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  夾竹桃; 強(qiáng)心苷; 甾苷; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

脂肪細(xì)胞刺激因子 (LSP)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝     3-Amino-2,6-piperidinedione hydrochloride  中文名：  分子式：C5H9ClN2O2 

脂肪酸合成酶（FAS）測(cè)試盒   紫外分光光度法   50管/48樣  Venlafaxine hydrochloride  中文名：鹽酸文拉法辛  分子式：C17H28ClNO2  度：98.0%

Fosaprepitant dimeglumine  265121-04-8  中文名：  分子式：C30H40F7N6O10P    兔骨保護(hù)素elisa試劑盒   兔骨保護(hù)素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔骨保護(hù)素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔骨保護(hù)素試劑盒、兔骨保護(hù)素elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Pazopanib  444731-52-6  中文名：帕唑帕尼  分子式：C21H23N7O2S    兔鉤端螺旋體IgGelisa試劑盒   兔鉤端螺旋體IgG試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔鉤端螺旋體IgG試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔鉤端螺旋體IgG試劑盒、兔鉤端螺旋體IgG elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate  921769-65-5  中文名：卡培他濱  分子式：C16H20FN3O7    兔分泌型球蛋白Aelisa試劑盒   兔分泌型球蛋白A試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   兔分泌型球蛋白A試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔分泌型球蛋白A試劑盒、兔分泌型球蛋白A elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  

Irbesartan  138402-11-6  中文名：厄貝沙坦  分子式：C25H28N6O    兔骨橋素(OPN)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Isoniazid  54-85-3  中文名：異  分子式：C6H7N3O    兔鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

牛乳頭瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸乳酸脫氫酶（LDH）測(cè)試盒   Lactate dehydrogenase (LDH) test kit  3-Acetylcoumarin  中文名：3-乙?；愣顾?/span>  分子式：C11H8O3  度：99.0%

乳酸（LD）測(cè)試盒（測(cè)血清、組織等）   Lactic acid (LD) test case (serum, tissue, etc.)  3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione  55604-88-1  中文名：  分子式：C8H8O4 

乳酸（LD）測(cè)試盒（測(cè)全血）   Lactic acid (LD) test case (whole blood)  3a-Hydroxy-3,3a,7,7a-tetrahydrobenzofuran-2,6-dione  55604-88-1  中文名：  分子式：C8H8O4  度：%  關(guān)鍵詞：  植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

乳酸（LD）（血清、組織）檢測(cè)   Lactic acid (LD) (whole blood) detection  3-Acetylcoumarin  3949-36-8  中文名：3-乙?；愣顾?/span>  分子式：C11H8O3  度：99.0%  關(guān)鍵詞： 

乳酸（LD）（全血）檢測(cè)   Lactate dehydrogenase (LDH) detection  3-Acetylcoumarin  3949-36-8  中文名：3-乙?；愣顾?/span>  分子式：C11H8O3

注意事項(xiàng)：

牛乳頭瘤病毒探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。