PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。

4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測, 實(shí)現(xiàn)基因的相對定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請?zhí)峁┮阎娜L基因序列。

（03）請?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f7-Benzyloxyindole  中文名：7-芐氧基吲哚  分子式：C15H13NO    大鼠環(huán)0酸鳥苷   英文名稱：   Cyclic guanosine monophosphate   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   cGMP

7-Amino-4-methylcoumarin  中文名：7-氨基-4-甲基香豆素  分子式：C10H9NO2    乙酰膽堿酯酶（T－CHE）檢測   Acetylcholine ansferase (ChAT) detection

7-Amino-3-methyl-3-cephem-4-carboxylic acid  中文名：  分子式：C8H10N2O3S    乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶（ChAT）檢測   Detection of the ache of the choline

7-Acetoxy-4-methylcoumarin  中文名：7-乙酰氧基-4-甲基香豆素  分子式：C12H10O4    丁酰膽堿酯酶檢測   Glucose -6- phosphate dehydrogenase (G-6-PD) detection

7,8-Dimethoxy-1,3-dihydro-2H-3-benzazepin-2-one  中文名：  分子式：C12H13NO3    葡萄糖-6-0酸脫氫酶（G－6－PD）檢測   BN N-ACETYL-D-GLUCOSAMINIDASE (NAG) detection

生成素相關(guān)生長因子 (AGF)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝  Oxiracetam  中文名：奧拉西坦  分子式：C6H10N2O3 

生成素相關(guān)生長因子   英文名稱：   Angiopoietin Growth Factors   英文縮寫：   AGF   規(guī)格：   48T/96T  Oxymetholone  434-07-1  中文名：康復(fù)龍  分子式：C21H32O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

生成素相關(guān)生長因子   英文名稱：   Angiopoietin Growth Factors   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   AGF  Withaphysalin S  949172-13-8  中文名：  分子式：C29H40O8  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

生成素-2   英文名稱：   Angiopoietin-2   英文縮寫：   ANG2   規(guī)格：   48T/96T  Oxymetholone  中文名：康復(fù)龍  分子式：C21H32O3 

生成素-2   英文名稱：   Angiopoietin-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ANG2  Withaphysalin S  949172-13-8  中文名：  分子式：C29H40O8

3,3'-Sulfonyldianiline  599-61-1  中文名：3,3'-二氨基二苯砜  分子式：C12H12N2O2S    谷胱甘肽過氧化物酶   英文名稱：   glathione peroxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GSH-Px

1,4-Bis[2-(4-methyl-5-phenyloxazolyl)]benzene  3073-87-8  中文名：1,4-二[2-(4-甲基-5-苯基惡唑基)]苯  分子式：C26H20N2O2    谷胱甘肽過氧化物酶   英文名稱：   glathione peroxidase   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   GSH-Px

Bis(3-ethyl-5-methyl-4-maleimidophenyl)methane  105391-33-1  中文名：雙(3-乙基-5-甲基-4-馬來酰亞胺基苯基)甲烷  分子式：C27H26N2O4    生長激素結(jié)合蛋白 (P)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

Bisphenol P  2167-51-3  中文名：雙酚P  分子式：C24H26O2    半乳糖凝集素 -3(Galectin-3)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

(+)-Noe's reagent  87248-50-8  中文名：(+)-核歐沃豪斯效應(yīng)試劑  分子式：C24H38O3    腦神經(jīng)相關(guān)生長蛋白 -43(GAP-43)   作用：   ELISA   規(guī)格：   48T/96T   進(jìn)口分裝

平尾毛細(xì)線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒廠家人可溶性白細(xì)胞抗原G(sHLA-G)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Capecitabine  中文名：卡培他濱  分子式：C15H22FN3O6 

人可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tigecycline  中文名：  分子式：C29H39N5O8 

人抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tigogenin  77-60-1  中文名：劍麻皂素  分子式：C27H44O3  度：98.0%  關(guān)鍵詞：  毛地黃屬; 萬年蘭屬; 螺甾烷; 中藥對照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫

人抗心0脂抗體IgG(ACA-IgG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T              Tigogenin  77-60-1  中文名：劍麻皂素  分子式：C27H44O3 

人抗心0脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Tigogenin  中文名：劍麻皂素  分子式：C27H44O3

注意事項(xiàng)：

平尾毛細(xì)線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。