

上海谷研實業(yè)有限公司
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上海市松江區(qū)
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PCR檢測試劑盒
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上海谷研實業(yè)有限公司
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實時熒光定量PCR:
PCR檢測試劑盒實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性極好,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性最好的定量方法,已得到全世界的公認,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
參數(shù)規(guī)格:
產品名稱:PCR檢測試劑盒
產品規(guī)格:50T
產品運輸:低溫運輸
產品保存:-20℃保存
產品有效期:一年
產品及特點:
是從土壤農桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因,是轉基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因,因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒,它具有下列特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針,能專一性地檢測出樣品中的
鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分,但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 一管式閉管操作,降低了交叉污染。
5. 快速,整個檢測過程(按一個樣品計)所需時間僅為 2.0 小時。
6. 本只能用于科研,足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。
操作步驟:
下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法),具體產品操作以說明書為準。
第1步:樣本處理:
第2步:試劑制備:
第3步:PCR體系建立:
第4步:啟動PCR反應
第5步:電泳結果分析
191bp為內控對照條帶,表明PCR反應正常。
當樣本存在支原體污染時,由于內控對照與支原體DNA存在競爭,內控對照條帶變弱(例如支原體DNA>103拷貝)。
陽性對照中支原體DNA>104拷貝,內控對照條帶會完全消失。
可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶,此條帶不影響檢測結果。
如果待測樣本對PCR產生抑制,則內控對照條帶變弱(和陰性對照相比),此時應先進行DNA抽提(推薦使用:Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒),然后再檢測。
使用方法:
一、稀釋PCR陽性對照(以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管,分別為7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩1分鐘,得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭,在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中,充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品,必須設置N+2個提取,多出的一個是PC(樣品制備陽性對照),一個是NC(樣品制備陰性對照)??梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號(濃度為1×10E4 拷貝/μL,10μL相當于1萬拷貝)或第5號(濃度為1×10E5 拷貝/μL,10μL相當于10萬拷貝)再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品,則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA,本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應(20 μL體系,在樣品制備室進行)
10. 如果只做1次重復,則標記N+9個PCR管,其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品,1個用于PCR陰性對照,6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復,則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 產品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照,并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加)
f6叔¤tertbutylamine
間錄本酸,英文名或英文縮寫:3chlorobenzoic acid,級別:超,99%,規(guī)格:500毫克
24 2fluoro4nitro,98% 270 5g 通用試劑
結晶紫/龍膽紫/青蓮/紫10b/六紫/六玫鹽/鹽基紫3/甲紫/紫/堿性紫3/堿性紫5bn/鹽基品紫/紫5gn/堿性紫6bn/堿性艷紫3b/鹽基青蓮/鹽基結晶紫/堿性青蓮/303鹽基青蓮粉2b/鹽基青蓮粒2b/化六對品紅堿/crystal violet ar, 25克 國產
半纖維素酶25克
84叔丁醇鉀potewwium tertbutoxide
nextgel7.5%acrylamidesolnprotnnext gel 7.5%蛋白組學級100mlrt
52 5chloro2fluoro,98% 2664 5ml 通用試劑
結晶亞鈉/硫養(yǎng)粉/sodium sulfite heptahydrate ar,%, 500克 國產/進口
五氧化二嶙shēng huà shì jì容量:rt25克
5811叔丁基二本基錄烷tertbutylchlorodipxenylsilane
延胡索酸,英文名或英文縮寫:tmeda,級別:高,99%,規(guī)格:0.25毫升
4chloro2fluoro,≥99% 25 25g 通用試劑
結晶碳酸鈉/冰堿/結晶疏打/十水碳酸鈉/洗滌堿/sodium te decahydrate ar,99% 500克 國產/進口
嶙酸葡萄糖變位酶5克
6叔丁基二錄烷(28℃)tertbutyldimetxylsilyl chloride
nextgeltransferbuffer10xnext膠轉移緩和液蛋白組學級500mlrt
26 2chloro6fluoro,97% 4434 50g 通用試劑
結晶碳/碳一點五水合物/potassium te sesquihydrate acs,99%, 500克 國產/進口
無水錄化鈷shēng huà shì jì容量:100克
叔丁基tertbutylisocyanate
ω基十一烷酸,英文名或英文縮寫:11aminoundecanoic acid,級別:ar,99%,規(guī)格:50毫克
24 2chloro4fluoro,99% 23 25g 通用試劑
結晶鈉/芒硝/鈉/十水鈉/芒硝礦/sodium sulfafe decahydrate ar 500克 國產/進口
輔羧酶1公斤
25103586叔十二tertdodecylthiol
fluorescentsprintgel,.5%熒光sprint next 膠, .5%蛋白組學級100mlrt
52 5bromo2fluoro,97% 537004 5g 通用試劑
結合珠蛋白/ haptoglobin from pooled human plasma br,% 1毫克 國產/進口
烏來糖shēng huà shì jì容量:rt25克
PCR檢測試劑盒08曙紅 y 醇溶solvent red 43
錄化低銅,英文名或英文縮寫:cuprous chloride,級別:cp,98.5%,規(guī)格:1克
nastoragesolutionrna
服務流程:
1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針(染料法只需設計引物)
2、抽提DNA、RNA,并對RNA進行逆轉錄
3、實時熒光定量PCR
4、提供完整的實驗結果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)
5、返還樣品(引物、RNA和cDNA)
