PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法：

1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     

10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             

4 μl     引物1（10pM）                 

2 μl     引物2（10pM）                 

2 μl     Taq酶 （2U/μl）               

1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  

1 μl      加ddH2O至 50 μl  

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保7min。

3：伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。

4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl氯仿進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。

概述：

熒光定量PCR的基本原理就是在PCR擴(kuò)增過程中，隨著PCR循環(huán)數(shù)的遞增，PCR產(chǎn)物不斷積累，熒光信號(hào)也會(huì)相應(yīng)的增加，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度的變化來對(duì)PCR反應(yīng)進(jìn)行實(shí)時(shí)的監(jiān)測(cè)。本公司根據(jù)您的科研需求可以提供SYBR Green染料法和TaqMan探針法。通過對(duì)DNA或RNA的熒光定量PCR監(jiān)測(cè), 實(shí)現(xiàn)基因的相對(duì)定量、定量和定性分析。

探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：

熒光定量PCR服務(wù)：

簡(jiǎn)介：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)于1996年由美國(guó)Applied Biosystems公司推出，該技術(shù)不僅實(shí)現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規(guī)PCR相比，它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問題、自動(dòng)化程度高等特點(diǎn)，目前該技術(shù)已被廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾的實(shí)驗(yàn)結(jié)果等。我公司為您提供全套實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)服務(wù)，全部實(shí)驗(yàn)皆使用進(jìn)口試劑完成，主要定量PCR儀器。

1、熒光定量PCR服務(wù)要求：

（01）請(qǐng)您提供新鮮的且盡量多的材料；或直接提供純化好的總RNA（大于 5 ug/樣品）；或直接提供純化好的DNA（大于 5 ug/樣品）。

（02）請(qǐng)?zhí)峁┮阎娜L(zhǎng)基因序列。

（03）請(qǐng)?zhí)峁┍M可能詳細(xì)的背景資料：DNA/RNA 來源等

2、熒光定量PCR操作程序

（01）引物（探針）設(shè)計(jì)與合成。

（02）提取DNA/RNA，樣本逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。

（03）進(jìn)行Real Time PCR實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析。

（04）實(shí)驗(yàn)完成后，提供完整的實(shí)驗(yàn)報(bào)告（含軟件分析結(jié)果）及引物等實(shí)驗(yàn)材料。

3、熒光定量PCR的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)：

  我公司根據(jù)客戶的樣品數(shù)量進(jìn)行不同的收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)。

以下是公司正在熱銷產(chǎn)品產(chǎn)品：

f人周期素依賴性激酶1elisa試劑盒   人周期素依賴性激酶1試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人周期素依賴性激酶1試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人周期素依賴性激酶1試劑盒、人周期素依賴性激酶1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。     2-Hydroxyquinoxaline  中文名：  分子式：C8H6N2O 

人周期素依賴性激酶1(CDK1)酶聯(lián)吸附測(cè)定試劑盒   Human CDK1 (Cyclin Depende Kinase 1) ELISA Kit  2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  17241-40-6  中文名：  分子式：C15H10O3  度：%  關(guān)鍵詞：  白花蛇舌草; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

人周期素依賴性激酶1(CDK-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  2-Iodo-3-oxo-4-azaandrostane-17-carboxylic acid  中文名：  分子式：C19H28INO3  度：98.0%

人重組激活基因2elisa試劑盒   人重組激活基因2試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   人重組激活基因2試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：人重組激活基因2試劑盒、人重組激活基因2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  2-Flurbiprofen  51543-40-9  中文名：氟比洛芬  分子式：C15H13FO2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

人重組激活基因2(RAG-2)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           2-Hydroxy-3-methylanthraquinone  中文名：  分子式：C15H10O3

3-Amino-2-naphthoic acid  5959-52-4  中文名：3-氨基-2-萘甲酸  分子式：C11H9NO2    肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A   英文名稱：   Pulmonary surfacta associated protein type A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   SP-A

(S)-(-)-2-Amino-3-methyl-1,1-diphenyl-1-butanol  78606-95-9  中文名：(S)-(-)-2-氨基-3-甲基-1,1-二苯基-1-丁醇  分子式：C17H21NO    β-谷甾醇   英文名稱：   β Sitosterol   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   β Sitosterol

4-Amino-N-methylbenzamide  6274-22-2  中文名：4-氨基-N-甲基苯甲酰胺  分子式：C8H10N2O    同型半胱酸（Hcy）測(cè)定試劑盒（酶循環(huán)法）

6-Aminoindole  5318-27-4  中文名：6-氨基吲哚  分子式：C8H8N2    β-（D3-H）測(cè)定試劑盒（酶比色法）

Aminophenazone  58-15-1  中文名：氨基比林  分子式：C13H17N3O    D-二聚體（D-Dimer）測(cè)定試劑盒（膠乳增強(qiáng)比濁法）小鼠蛋白激酶B(PKB)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Crenulatin  63026-02-8  中文名：大花紅天素  分子式：C11H20O6  度：98.5%  關(guān)鍵詞：  抗真菌; 抑制細(xì)胞凋亡; 促進(jìn)生長(zhǎng); 阿魏; 半萜類; 中藥對(duì)照品; 中藥標(biāo)準(zhǔn)品; 植物提取物; 天然產(chǎn)物; 天然產(chǎn)物庫(kù)

小鼠蛋白激酶A(PKA)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Coumarin 7  27425-55-4  中文名：香豆素 7  分子式：C20H19N3O2  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠蛋白激酶A   英文名稱：   Mouse Protein Kinase A   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   PKA  Coumarin 6  38215-36-0  中文名：香豆素 6  分子式：C20H18N2O2S  度：98.0%  關(guān)鍵詞： 

小鼠彈性蛋白   英文名稱：   Mouse Elastin   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   ELN  Nandrolone laurate  中文名：月桂酸諾龍  分子式：C30H48O3 

小鼠膽囊收縮素elisa試劑盒   小鼠膽囊收縮素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠膽囊收縮素試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠膽囊收縮素試劑盒、小鼠膽囊收縮素eisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。  Colelomycerone A  中文名：  分子式：C17H18O6  度：98.0%

微細(xì)毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒廠家Dehydroepiandrosterone acetate  中文名：醋酸去氫表雄酮  分子式：C21H30O3    病毒抗體elisa試劑盒   病毒抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T  

Dehydroepiandrosterone  中文名：脫氫表雄酮  分子式：C19H28O2    豬偽狂犬病抗體elisa試劑盒   豬偽狂犬病抗體試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬偽狂犬病抗體試劑盒，

Dehydroadynerigenin β-neritrioside  中文名：  分子式：C42H62O17    豬褪黑素elisa試劑盒   豬褪黑素試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   豬褪黑素試劑盒，

Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside  中文名：  分子式：C36H52O13    豬細(xì)胞色素氧化酶（CC0）ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Dehydroadynerigenin digitaloside  中文名：  分子式：C30H42O8    豬細(xì)胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

注意事項(xiàng)：

微細(xì)毛圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒廠家1．基礎(chǔ)程序；

2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；

3．反應(yīng)時(shí)間；

4．循環(huán)次數(shù)；

5．PCR 反應(yīng)液的配制；

6．PCR技術(shù)的基本原理；

7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；

8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；

9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。點(diǎn)擊了解更公司產(chǎn)品。