實時熒光定量PCR：

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的：

1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性極好，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。

2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現(xiàn)性最好的定量方法，已得到全世界的公認，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：芥末源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒運輸

英文名稱：

貨號: GOY-M4693

產(chǎn)品規(guī)格：50T

產(chǎn)品運輸：低溫運輸

產(chǎn)品保存：-20℃保存

產(chǎn)品有效期：一年

產(chǎn)品及特點:

是從土壤農(nóng)桿菌 CP4 菌株中分離得到的抗除草劑草甘膦基因，是轉(zhuǎn)基因植物研究中最為常用的一種篩選標記基因，因此本公司根據(jù)探針法 qPCR 原理開發(fā)了專門用于檢測 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 的試劑盒，它具有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板。

2. 根據(jù) 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 保守區(qū)域設計引物和探針，能專一性地檢測出樣品中的

鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分，但不能檢測其他非 鮑皰疹樣病毒染料法熒光定量PCR試劑盒 成分。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 一管式閉管操作，降低了交叉污染。

5. 快速，整個檢測過程（按一個樣品計）所需時間僅為 2.0 小時。

6. 本只能用于科研，足夠 50 次 20uL 體系的探針法熒光定量 PCR。

操作步驟：

下列圖示以Venor Gem OneStep 支原體 常規(guī)PCR 檢測試劑盒 (一步法)，具體產(chǎn)品操作以說明書為準。

第1步：樣本處理：

第2步：試劑制備：

第3步：PCR體系建立：

第4步：啟動PCR反應

第5步：電泳結(jié)果分析

191bp為內(nèi)控對照條帶，表明PCR反應正常。

當樣本存在支原體污染時，由于內(nèi)控對照與支原體DNA存在競爭，內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ɡ缰гwDNA＞103拷貝）。

陽性對照中支原體DNA＞104拷貝，內(nèi)控對照條帶會完全消失。

可能在80-90bp存在引物自退火形成的條帶，此條帶不影響檢測結(jié)果。

如果待測樣本對PCR產(chǎn)生抑制，則內(nèi)控對照條帶變?nèi)酰ê完幮詫φ障啾龋?，此時應先進行DNA抽提（推薦使用：Venor Gem Sample Preparation Kit 支原體DNA抽提試劑盒），然后再檢測。

使用方法：

一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）

1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。

2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。

3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。

4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。

7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

二、樣品DNA的制備

8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。

9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。

三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）

10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。

11. 產(chǎn)品僅用于科研在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）

f凋亡相關因子   英文名稱：   apoptosis-inducing factor Fas   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫：   Fas  Cleroindicin C  183626-28-0  中文名：  分子式：C8H12O3 

淀粉酶 b 1-42(Amyloid b 1-42)   作用：   ELISA   規(guī)格：   96T   德國 IBL     Methylprednisolone  83-43-2  中文名：甲基潑尼松龍  分子式：C22H30O5 

淀粉含量測試盒   可見分光光度法   50管/48樣  Propranolol hydrochloride  中文名：鹽酸普萘洛爾  分子式：C16H22ClNO2 

氮快速測試盒    niogen rapid test case                 Physapruin A  155178-03-3  中文名：  分子式：C28H38O7 

氮快速測定試劑盒    niogen rapid determination kit  Physapruin A  中文名：  分子式：C28H38O7

Cefotaxime sodium  64485-93-4  中文名：頭孢噻肟鈉  分子式：C16H17N5NaO7S2    人谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Triamcinolone acetonide  76-25-5  中文名：曲安奈德  分子式：C24H31FO6    人谷胱甘肽(GSH)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Tryptophan  153-94-6  中文名：  分子式：C11H12N2O2    人17-類固醇(17-KS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           

4,6-Dichloro-2-(propylthio)pyrimidin-5-amine  145783-15-9  中文名：  分子式：C7H9Cl2N3S    人脂多糖elisa試劑盒   人脂多糖試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂多糖試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂多糖試劑盒、人脂多糖elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

4,6-Dichloro-5-nitro-2-propylthiopyrimidine  145783-14-8  中文名：  分子式：C7H7Cl2N3O2S    人脂多糖結(jié)合蛋白elisa試劑盒   人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：人脂多糖結(jié)合蛋白試劑盒、人脂多糖結(jié)合蛋白elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。小鼠17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Bathophenanthroline  1662-01-7  中文名：紅菲繞啉  分子式：C24H16N2  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠17-類固醇(17-KS)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝  Baclofen  1134-47-0  中文名：巴氯芬  分子式：C10H12ClNO2  度：98.0%  關鍵詞： 

小鼠16α羥基雌elisa試劑盒   小鼠16α羥基雌試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   小鼠16α羥基雌試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠16α羥基雌試劑盒、小鼠16α羥基雌elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。     Buergerinin G  中文名：  分子式：C9H12O4 

小鼠16α羥基雌1(16-αOHE-1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝           Azithromycin dihydrate  中文名：阿奇霉素二水物  分子式：C38H72N2O12  

小鼠16α羥基雌1(16-αOHE-1)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Estradiol heptanoate  4956-37-0  中文名：庚酸雌二醇  分子式：C25H36O3  度：98.0%  關鍵詞：

芥末源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒運輸Boldenone acetate  中文名：寶丹酮醋酸酯  分子式：C21H28O3  度：98.0%  小鼠FMS樣酪酸激酶3(Flt3)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Trenbolone acetate  中文名：  分子式：C20H24O3  度：98.0%  小鼠E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Trenbolone  中文名：群勃龍  分子式：C18H22O2  度：98.0%  小鼠E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白(E-Cad)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝        

Mestanolone  中文名：美雄諾龍  分子式：C20H32O2  度：98.0%  小鼠DNA甲基轉(zhuǎn)移酶1(DNMT1)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

Nandrolone undecylate  中文名：十一酸諾龍  分子式：C29H46O3  度：98.0%  小鼠C型尿肽(CNP)ELISA試劑盒   96T/48T   試劑盒   組裝/原裝

服務流程：

芥末源性成分探針法熒光定量PCR試劑盒運輸1、根據(jù)客戶提供的基因序列設計特異性引物和熒光探針（染料法只需設計引物）

2、抽提DNA、RNA，并對RNA進行逆轉(zhuǎn)錄

3、實時熒光定量PCR

4、提供完整的實驗結(jié)果報告(檢測數(shù)據(jù)、溶解曲線、擴增曲線)

5、返還樣品（引物、RNA和cDNA）