細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

小鼠食管平滑肌細(xì)胞【MouseEsophageal:NormalEsophagealSmoothMuscleCells】
產(chǎn)品描述：平滑肌的主要功能是負(fù)責(zé)空腔臟器的收縮，如血管、胃腸道、膀胱以及子宮等器官。它的結(jié)構(gòu)與骨骼肌有很大的不同。食管壁包括三層，外縱形和內(nèi)環(huán)形，中間肌層是黏膜層。食管的蠕動(dòng)是由平滑肌收縮嚴(yán)格控制。平滑肌的收縮可能是通過兩條不同的途徑激活磷脂酶（增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度和激活G蛋白）并激活PKC-epsilon依賴的信號通路。公司提供的小鼠食管平滑肌細(xì)胞，均來自新鮮組織。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠食管平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseEsophagealPrimaCell:NormalEsophagealSmoothMuscleCellsCatNo.3-4148)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠食管平滑肌細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時(shí)保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
注意事項(xiàng)：
1. 接收到小鼠食管平滑肌細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。
3.嚴(yán)格無菌操作，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。

以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：
人細(xì)胞;Hela P10s-11F1,3-二溴-7-叔丁基芘(>97.0%(GC))1,3-Dibromo-7-tert-butylpyrene質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(GC)

豚鼠源細(xì)胞 貓腎細(xì)胞，F81細(xì)胞 FDC-P1細(xì)胞，小鼠骨髓細(xì)胞6,12-二溴屈(>98.0%(HPLC))6,12-Dibromochrysene質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)

人肝細(xì)胞;HL-7702[L-02]2,5-二苯基惡唑(>98%,BC)PPO質(zhì)量規(guī)格：>98%,BC

PRSS2 Others Mouse 小鼠 PRSS2 / y2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 乙醇酸鈉(>98%,BR) glycolate質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

肝星形細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)司班60Span* 60質(zhì)量規(guī)格：BR
MOLT-4 人急性母細(xì)胞白血病細(xì)胞蘋果酸舒尼替尼Sunitinib Malate質(zhì)量規(guī)格：>99.0%,BR

NCI-H1975人肺腺癌細(xì)胞 Human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1975 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS蘋果酸舒尼替尼(標(biāo)準(zhǔn)品)Sunitinib Malate質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

ADIPOQ Protein Mouse 重組小鼠 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (His 標(biāo)簽)舒洛芬Suprofen質(zhì)量規(guī)格：>98%

SV-40轉(zhuǎn)化肺成纖維細(xì)胞;WI38/VA13 人胰島β細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL他克莫司Tacrolimus /FK506 monohydrate質(zhì)量規(guī)格：≥98%,細(xì)胞培養(yǎng)級

人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞;HEC-1-B他克莫司(標(biāo)準(zhǔn)品)Tacrolimus /FK506 monohydrate質(zhì)量規(guī)格：≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元堿性氧化鋁1公斤

人胚胎心臟成纖維樣細(xì)胞;HEH2 人子宮成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL膽減氧化酶(-20℃) CHOLINq OXIDcSq 908-67-2

人表皮角質(zhì)細(xì)胞-新生HEK-nN,N'-羰基二咪唑 1,1'-Carbonyldiimidazole (CDI) 530-62-1 10G 通用試劑

RK2 Others Rat 大鼠 kB / RK2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 鈉測試盒(帶標(biāo)準(zhǔn))10個(gè)RT

大鼠直腸平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL(dNTP混合物)
小鼠食管平滑肌細(xì)胞BMP2 Others Human 人 BMP-2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) DL-4-羥基-3-甲氧基扁桃酸5克

EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細(xì)胞;KM9333-基 3-Aminobutanoic acid,97% 541-48-0 5G 通用試劑

CD3E Others Human 人 CD3e / CD3 epsilon 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 氧化鐵;紅色氧化鐵;205鐵紅;氧化鐵 Iron oxidq rqd;Iron(III) oxidq;Fqrric oxidq 1309-37-1

人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞 Human umbilical cord mesenchymal stem cells鎳絲25克

Saos-2細(xì)胞，人成骨肉瘤細(xì)胞 鮮綠青霉 人二倍體細(xì)胞;HEL1936-15-8橙黃G;1-本基偶氮-2-酚-6,8-二磺酸鈉;桔黃G;金橙G;橙黃GG;耐光橙G;酸性耐光桔黃Orange G;Acid orange 10;Wool orange 2G;Acid orange G;Fast light orange G;C.I. 16230