凍保存細(xì)胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

參數(shù)規(guī)格：
小鼠胰島細(xì)胞【MouseIslet：IsletCells】
產(chǎn)品描述：胰島B細(xì)胞是胰島細(xì)胞的一種,屬內(nèi)分泌細(xì)胞,能分泌胰島素,起調(diào)節(jié)血糖含量的作用。胰島B細(xì)胞功能受損，胰島素分泌絕對或相對不足，從而引發(fā)糖尿病。小鼠胰島細(xì)胞分離自正常小鼠胰腺組織，胰島細(xì)胞與糖尿病的發(fā)生相關(guān)，對胰島細(xì)胞的研究有利于糖尿病的治療。公司提供的小鼠胰島細(xì)胞采用膠原酶消化制備而來。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司專利產(chǎn)品小鼠胰島細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒(MouseIsletPrimaCell:NormalIsletCellsCatNo.3-4393)來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞（如脂肪細(xì)胞、纖維細(xì)胞等）的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，小鼠胰島細(xì)胞可以保持原代細(xì)胞的分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。

實驗要點及說明 ：
1．本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，懸浮細(xì)胞可使用滴片法； 
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造，并經(jīng)過鉻酸洗液處理； 
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕； 
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率； 
5．如果細(xì)胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
培養(yǎng)操作:
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?/span> 細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  
3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；
1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。
3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
人胚肺二倍體細(xì)胞;HEL-2萊苞迪甙C（標(biāo)準(zhǔn)品）Rebaudioside C質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠骨髓瘤細(xì)胞;IR983F 結(jié)腸腺癌細(xì)胞，Caco-2細(xì)胞 WEHI 164細(xì)胞，鼠纖維肉瘤細(xì)胞系D-(-)-扁桃酸;R-扁桃酸(R)-(?)-Mandelic acid質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

GBC-SD, 人膽囊癌細(xì)胞 Human1-氨基海因鹽酸鹽;AHD，1-氨基乙內(nèi)酰脲鹽酸鹽1-Aminohydantoin Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

CD99L2 Others Mouse 小鼠 CD99L2 / MIC2L1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 1-氨基海因鹽酸鹽（標(biāo)準(zhǔn)品）1-Aminohydantoin Hydrochloride質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品

尿道上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)人促腎上腺皮質(zhì)激素(1-24),替可克肽ACTH (1-24), human質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
CNE-1 高分化鼻咽癌細(xì)胞人參皂苷Rb1(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rb1質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

P9-EGFP-puro小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞 P9-EGFP-puro mouse bone marrow somal cells 1640+10%FBS+1%P/S人參皂苷Rb2（標(biāo)準(zhǔn)品）Ginsenoside Rb2質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

CD40LG Protein Canine 重組狗 CD40L / CD154 / TNFSF5 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)人參皂苷Rb3(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rb3質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

人心肌細(xì)胞 (HCMa) (1×106 ) RGC-5, 小鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞 Mouse人參皂苷Rc(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rc質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠T細(xì)胞瘤細(xì)胞;Cyc-Tag(S49)人參皂苷Rd(標(biāo)準(zhǔn)品)Ginsenoside Rd質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品
山羊腎上皮樣細(xì)胞;DG-K1N,N-二去甲基鹽酸曲美布汀-d5N,N-Didesmethyl Trimebutine-d5 Hydrochloride

CDC37 Others Mouse 小鼠 CDC37 / CDC37A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) N,N-二去甲基鹽酸曲美布汀N,N-Didesmethyl Trimebutine Hydrochloride

腮腺細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)N-去甲基鹽酸曲美布汀N-Demethyl Trimebutine Hydrochloride

高背鯽魚尾鰭細(xì)胞;GBJd 人正常皮膚細(xì)胞，TE 353.Sk細(xì)胞 HO-8910(卵巢癌細(xì)胞)柚皮素-4'-O-β-D-葡萄糖苷酸Naringenin-4'-O-beta-D-Glucuronide

人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞;U251N-甲酰伐倫克林N-Formyl Varenicline
小鼠胰島細(xì)胞CSF3 Others Human 人 G-CSF / GCSF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 二乙基乙酰與米酸酯，英文名或英文縮寫：Dietxyl acetamidomalonate，級別：BR，99%，規(guī)格：5毫克

tTA基因修飾的小鼠胰腺癌細(xì)胞(B類);Pan02-CAG-tTA-4C52，2-二羌基二流代-6，6-聯(lián) 6-xy7noXY-2-NcPHTHYL DISULFIDq 6088-21-3

CCL20 Others Mouse 小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 聚醇縮，英文名或英文縮寫：PVF，級別：AR，99%，規(guī)格：5克

CM-M096小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL噻本隆shēng huà shì jì容量：25克

A-375 [A375], 人惡性素瘤細(xì)胞株 瘤細(xì)胞,U-937細(xì)胞 NCI-N87(人胃癌細(xì)胞)Polypeptone 500g原裝 Japan
收到小鼠胰島細(xì)胞如何處理？
1、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象。若有，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸浮）、細(xì)胞形態(tài)、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子、傳代比例、換液頻率等。
4、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松。
6、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作。

公司提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織，公司提供的小鼠源原代細(xì)胞均來自新鮮組織，用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件，以降低雜細(xì)胞的污染，同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在公司生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下，原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài)，進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。