成人皮膚成纖維細(xì)胞取物【Human Skin: Normal Dermal Fibroblasts Derivatives】
產(chǎn)品描述：人皮膚成纖維細(xì)胞提取物是從人原代皮膚成纖維細(xì)胞提取的，人原代皮膚成纖維細(xì)胞從正常人皮膚成纖維組織制備。正常成人皮膚成纖維組織采集自各地方醫(yī)院，采集工作根據(jù)IRB 和 HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆，表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。             

cDNA制備：純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈，以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA，1 μl cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析，保證產(chǎn)品的質(zhì)量。     

蛋白制備：利用改良型RIPA Buffer (50mM Tris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)，離心去除組織碎片，通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度，組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF，-80度保存。            潛在的應(yīng)用： <1>已知基因的PCR克?。?/span><2>mRNA選擇性剪接；<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué)；<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。產(chǎn)品僅供科研使用

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

注意事項(xiàng)：
1. 接收到成人皮膚成纖維細(xì)胞取物，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張）。
產(chǎn)品僅供科研使用2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的）。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管完全吸出（嚴(yán)禁直接傾倒），放入另一無(wú)菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞）。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落，加入終止液終止。
6.1000rpm，5min離心，重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。
以下是公司正在熱銷的產(chǎn)品：

MousePlatelet-DerivedGrowthFactorSolubleReceptorα,PDGFsR-αELISA試劑盒小鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α(PDGFsR-α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 二乙基錫(標(biāo)準(zhǔn)品)  Diethyltin-dichloride  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,10ng/μl溶于環(huán)己烷

小鼠卵清蛋白特異性IgE(OVA sIgE)ELISA試劑盒 ，英文名： OVA sIgE ELISA Kit 草萘胺(標(biāo)準(zhǔn)品)  Napropamid  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

大鼠雌二醇(E2)ELISA檢測(cè)試劑盒RatEsadiol,E2ELISAKit 96T/48T 除蟲(chóng)脲標(biāo)準(zhǔn)溶液(10μg/ml,u=3%)  Diflubenzuron solution  質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=3%

人毒蕈堿型乙酰膽堿受體M2(mAChRM2)自身抗體試劑盒 Human muscarinic acetylcholine receptor M2(mAChRM2)aoaibody ELISA kit 二噻農(nóng)(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dithianon  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

RatMotilin,MTLELISAKit大鼠胃動(dòng)素(MTL)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 棉隆(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dazomet  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,97%

DNA探針聚合酶整合標(biāo)記試劑盒10 雙(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dichlorophene  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

MouseProAialNaiureticPeptide,Pro-ANPELISA試劑盒小鼠前心肽(Pro-ANP)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T 異丙凈(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dipropetryn  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品

小鼠卵泡抑素樣蛋白3(FSTL3)ELISA試劑盒 ，英文名： FSTL3 ELISA Kit 異菌脲標(biāo)準(zhǔn)溶液(100μg/ml,u=4%)  [3-(3,5-Dichlorophenyl)-2,4-dioxoimidazolidinyl]-N-(methylethyl)carboxamide standard solution  質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4%

人凝聚素(CLU)ELISA檢測(cè)試劑盒Humanclusterin,CLUELISAKit 96T/48T 異氯磷(標(biāo)準(zhǔn)品)  Dicapthon  質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品
雙白瑞香素

 Daphnoretin

分子式： C19H12O7

分子量： 352.297

CAS號(hào)： 2034-69-7

檢測(cè)方式：高效液相色譜法HPLC≥98%

規(guī)格：20mg50mg100mg500mg1g (可根據(jù)客戶需求包裝)

性狀： 本品為微黃色細(xì)針晶

作用與用途：本品用于含量測(cè)定。

提取來(lái)源：

本品為瑞香科植物了哥王[Wikstroemia viridiflora(Meissn.)Hook.f.(W.indica C.A.Mey.)的根等。

藥理性質(zhì)：熔點(diǎn)250～252℃

用法：

色譜條件:流動(dòng)相：0.1%水-(48:52)；檢測(cè)波長(zhǎng)為282nm (僅供參考)

貯藏方法：

2-8°C，置陰涼干燥處、避光保存。

注意事項(xiàng)：本品應(yīng)在低溫下保存，長(zhǎng)時(shí)間在暴露在空氣中，含量會(huì)有所降低。

成人皮膚成纖維細(xì)胞取物蛋白質(zhì)西方雜交10倍印跡膜轉(zhuǎn)移緩沖液500毫升 海藻酸鈉   alginate from brown;Algin  質(zhì)量規(guī)格：BR,度>98%

蛋白質(zhì)西方雜交印跡DAB顯色檢測(cè)試劑盒5 膠原酶I型(sigma)  Collagenase, Type1  質(zhì)量規(guī)格：≥125 CDU/mg ,Sigma分裝

蛋白質(zhì)西方雜交印跡ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒(含抗體)5 膠原酶II型(sigma)  Collagenase, Type2  質(zhì)量規(guī)格：≥125 CDU/mg ,Sigma分裝

蛋白質(zhì)西方雜交印跡ECL化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒5 膠原酶IV型(sigma)  Collagenase, TypeIV  質(zhì)量規(guī)格：≥160 CDU/mg,Sigma分裝

蛋白質(zhì)西方雜交印跡消除試劑盒20 鉬酸鈉二水(AR)   molybdate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印印跡膜麗春紅(PonceauS)染色試劑盒20 硅酸鎂（高）  Magnesium silicate  質(zhì)量規(guī)格：>98%

蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印印跡膜萘酚藍(lán)黑(NBB)染色試劑盒20 L-抗壞血酸鈉   L-ascorbate  質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

蛋類L-乳酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20 焦鈉(AR)   pyrophosphate  質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR

蛋類琥珀酸比色法定量檢測(cè)試劑盒20 碳酸氫銨(AR)  Ammonium bicarbonate  質(zhì)量規(guī)格：AR

蛋類羥比色法定量檢測(cè)試劑盒20 氯化銨(AR)  Ammonium chloride  質(zhì)量規(guī)格：>99.5%,AR
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。