含量測定

赤蘚紅含量的測定方法有重量法、分光光度比色法、高效液相色譜法、示波極譜法、表面增強拉曼光譜。

重量法（仲裁法）

1、方法提要

試樣溶解后，經(jīng)稀釋、酸化、煮沸，并經(jīng)過恒重過濾，再恒重，然后進行稱量計算。

2、儀器試劑

鹽酸溶液：1+49；1+199；儀器、設(shè)備：G4玻璃砂坩堝形過濾器。

3、測定方法

稱取約2.5g 試樣（精確至0.0001g），置于燒杯中，用水溶解后移入250mL 容量瓶中，稀釋至刻度，搖勻。吸取50mL 該溶液，置于250 mL 燒杯中，加熱至沸騰后，加入20 mL 鹽酸溶液(1+49)，再次煮沸，然后用5 mL 水沖洗燒杯內(nèi)壁，蓋上表面皿，在沸水浴上加熱約5h 后，放冷至室溫，用已在135℃±2℃烘至恒量，并冷卻稱量過的G4 玻璃砂芯坩堝，將沉淀物過濾。再每次用15mL 鹽酸溶液(1+199)沖洗，洗滌二次后，再用15mL 水洗一次，將沉淀物和G4 玻璃砂芯坩堝在135℃±2℃恒溫干燥箱中烘至恒量，在干燥器內(nèi)冷卻30min 后稱量。

分光光度比色法

1、方法提要

將試樣與已知含量的標樣分別用水溶解后，在最大吸收波長處，分別測其吸光度，然后計算出試樣的含量。

2、儀器試劑

乙酸銨溶液；赤蘚紅標準樣品（含量≥85.0%）；分光光度計；比色皿：10mm。

3、測試方法

赤蘚紅標樣溶液的配制：稱取約0.25g（精確至0.0001g）赤蘚紅標準樣品，溶于適量水中，移入1000mL 棕色容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。準確吸取10 mL，移入500 mL 棕色容量瓶中，加乙酸銨溶液稀釋至刻度，搖勻。

赤蘚紅試樣溶液的配制：稱量與操作方法同標樣溶液的配制。

將赤蘚紅標樣溶液和赤蘚紅試樣溶液分別置于10mm 比色皿中，同在最大吸收波長處用分光光度計測定各自的吸光度值，用乙酸銨溶液作參比液。

高效液相色譜法

1、方法提要

食品中的合成著色劑經(jīng)聚酰胺吸附法或液一液分配法提取后，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經(jīng)反相色譜分離，根據(jù)保留時間定性和與峰面積比較進行定量。

利用高效液相色譜法測定食品中合成著色劑的最小檢出量為18ng，當進樣量為0.025g樣品時，最低檢出濃度為0.20.72mg/kg。

2、測定方法

將制備好的樣品溶液放入分液漏斗中，加2mL鹽酸、三正辛胺正丁醇溶液(5%)10～20mL，充分振搖提取，靜置分取有機相，重復(fù)提取2～3次，每次10mL，直至有機相無色，合并有機相，用飽和硫酸鈉溶液洗2次，每次10mL，分取有機相，放于蒸發(fā)皿中，水浴加熱濃縮至l0mL，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加60mL正己烷，混勻，加氨水提取2～3次，每次5mL，合并氨水溶液層(含水溶性酸性色素)，用正己烷洗 2～3次，分取氨水層加乙酸調(diào)成中性，水浴加熱蒸發(fā)至近干，加水定容至5mL。經(jīng)濾膜(0.45μm)過濾，取10μL進高效液相色譜儀。

高效液相色譜分析參考條件

①色譜柱：YWG-Cl8，10μm不銹鋼柱，4.6mm×250mm。

②流動相：甲醇一乙酸銨溶液(0.02 mol/L)(pH4)。

③梯度洗脫：用濃度為20%～35%的甲醇洗脫5min；用濃度為35%～98%的甲醇5min；用濃度為98%的甲醇繼續(xù)洗脫6min。

④流速：1mL/min。

⑤紫外檢測器，波長254nm。

取相同體積樣液和合成著色劑標準使用液分別注入高效液相色譜儀，根據(jù)保留時間定性，外標峰面積法定量。

示波極譜法

1、儀器試劑

JP一303型示波極譜儀成都儀器廠；三電極系統(tǒng)滴汞電極、飽和甘汞電報、鉑電極；底液0．25 tool/L乙酸鈉一1 40 mol/L己酸(pH3．6)緩沖液；鹽酸、三正辛胺、正丁醇、正己烷、己酸；飽和硫酸鈉溶液；氨水(2+98)；赤蘚紅標準溶液(1 n~ nlL)。

2、測定方法

極譜條件：取適量上述樣品提取液0．10 1．00mL于10 mL具塞比色管中，加入底液至10 0mL，混勻，倒入電解池中測定。三電極系統(tǒng)，陰極二階導(dǎo)數(shù)掃描．超始電位一350 mv，于一570]TIr~r記錄極譜導(dǎo)數(shù)波高。

標準曲線制備：取赤蘚紅標準0．00，0．50，1．0o，2 50，5．0o，10．0，20．0，50 0 ug于10 mL比色管中，進行測定。 [3] 

表面增強拉曼光譜法

方法提要

理論計算拉曼采用密度泛函理論(DFT)在B3LYP/6-31G(d)水平上對赤蘚紅分子進行了構(gòu)型優(yōu)化,赤蘚紅的實驗拉曼光譜與理論計算拉曼對比具有很好的對應(yīng)性。采用金納米顆粒作為表面增強拉曼基底,從赤蘚紅與金膠混合體積比、溶液pH和混合時間對檢測條件進行優(yōu)化,混合體積比為1:1、pH為5、混合時間為10min時赤蘚紅溶液的檢測限可達到1μg/mL。研究結(jié)果證明以金膠為增強基底的表面增強拉曼光譜法可以快速準確地鑒定赤蘚紅,為日后檢測常規(guī)食品樣品中的赤蘚紅提供了基礎(chǔ)。