運(yùn)輸和保存：

視天氣狀況和運(yùn)輸距離遠(yuǎn)近，公司與客戶(hù)協(xié)商后選擇下述方式中的一種進(jìn)行。

1)1mL凍存細(xì)胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿(mǎn)干冰的泡沫保溫盒中進(jìn)行運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)盡快解凍復(fù)蘇細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，如無(wú)法立刻進(jìn)行復(fù)蘇操作，凍存細(xì)胞可在-80℃的條件下保存1個(gè)月。

2)T-25培養(yǎng)瓶充滿(mǎn)完全培養(yǎng)基后進(jìn)行常溫運(yùn)輸；收到細(xì)胞后請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)，如鋪瓶率超過(guò)85%請(qǐng)立即進(jìn)行傳代操作，如懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過(guò)夜以幫助未死亡的懸浮細(xì)胞能夠再次貼壁。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

    1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，*將組織剪成1mm3左右大??；

    2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

    3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織完全被消化；

    4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

    5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

    1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

    2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

    4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗（Abbioscience公司），然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

    5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

    6、用PBS沖洗3次，每次10min，*在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄去半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞收集，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，少量保存上清液（防止細(xì)胞吸走），加入部分新鮮培養(yǎng)基，吹打均勻后，加入到凍存管中，在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。

以下是公司正在打折促銷(xiāo)產(chǎn)品：

FN(HumanFibronectin)ELISAKit人纖連蛋白  規(guī)格：1g  訂購(gòu)|咨詢(xún)

IFN-Alpha(MouseInterferonAlpha)ELISAKit小鼠α干擾素  規(guī)格：1g  訂購(gòu)|咨詢(xún)

MYSELISAKit大鼠肌球蛋白  規(guī)格：20mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)

Mouserudimentalbovineserumalbumincheck-upELISAKit小鼠的牛血清白蛋白殘留檢測(cè)  規(guī)格：20mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)

DesELISAKit大鼠結(jié)蛋白  規(guī)格：0.5g  訂購(gòu)|咨詢(xún)

Nogo-AAb(Humananti-Nogo-Aantibody)ELISAKit人NOGO-A抗體  規(guī)格：100mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)

tTG-IgA(HumanAnti-tissuetransglutaminaseIgA)ELISAkit人抗組織轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶抗體IgA  規(guī)格：100mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)

CA724(MouseCA724)ELISAKit小鼠標(biāo)志物  規(guī)格：20mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)

MHCI/AgBI/H-1IELISAKit大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(lèi)  規(guī)格：2g  訂購(gòu)|咨詢(xún)

GATA4ELISAKit大鼠GATA結(jié)合蛋白4  規(guī)格：20mg/支  訂購(gòu)|咨詢(xún)

FII(MousecoagulationfactorII)ELISAKit小鼠凝血因子Ⅱ  規(guī)格：50mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)

Surv(Humananti-Survivinantibody)ELISAKit人抗存活素抗體/生存蛋白  規(guī)格：20mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)

IP-10/CXCL10ELISAKit大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10  規(guī)格：100mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)

ET(Mouseendotoxin)ELISAKit小鼠內(nèi)毒素  規(guī)格：凍干粉  訂購(gòu)|咨詢(xún)

GM-CSFAb(Humananti-Granulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactorantibody)ELISAKit人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子抗體  規(guī)格：30mg  訂購(gòu)|咨詢(xún)
4T1-RFP熒光標(biāo)記細(xì)胞株Nomilin沒(méi)食子酸(標(biāo)準(zhǔn)品)  分子式：C20H32O3  性狀：Powder  純度：%

Tenuifolin埃博霉素C  分子式：C20H34O3  性狀：Powder  純度：%

Chikusetsusaponin IVa沒(méi)食子酸丙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)  分子式：C27H34O7  性狀：Powder  純度：96.0%

Notoginsenoside Ft1沒(méi)食子酸丙酯  分子式：C33H46O16  性狀：Powder  純度：%

Rotundanonic acid2”-O-沒(méi)食子?；鸾z桃苷（標(biāo)準(zhǔn)品）  分子式：C20H32O3  性狀：Powder  純度：%

Pedunculoside1,2,3,4,6-O-沒(méi)食子酰葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)  分子式：C27H34O12  性狀：Powder  純度：%

3,4-seco-Olean-12-en-4-ol-3,28-dioic acid蒙花苷(標(biāo)準(zhǔn)品)  分子式：C20H28O3  性狀：Powder  純度：97.0%

Lupeol acetate迷迭香酸（標(biāo)準(zhǔn)品）  分子式：C20H30O3  性狀：Powder  純度：98.0%

Negundonorin A綿馬貫眾素ABBA(標(biāo)準(zhǔn)品)  分子式：C27H36O12  性狀：Powder  純度：%